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BUNSEN本生:酶標板如何處理,增加抗體結(jié)合能力?
更新時間:2023-09-18瀏覽:1230次

  BUNSEN本生:酶標板如何處理,增加抗體結(jié)合能力?


  根據(jù)酶標板與蛋白和其它分子結(jié)合能力的不同可以將酶標板分為以下幾類:

  1 高結(jié)合力酶標板:

  酶標板經(jīng)表面處理后蛋白結(jié)合能力大大增強,可達300~400ng IgG/cm2,主要結(jié)合的蛋白分子量>10kD。使用該類酶標板可提高敏感性,并可相對減少包被蛋白的濃度和用量,不足之處為較易產(chǎn)生非特異性反應(yīng)。抗原或抗體包被后,以非離子去污劑無法有效地封閉未結(jié)合蛋白的部位,需使用蛋白作為封閉劑。


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  2、中結(jié)合力酶標板:

  酶標板經(jīng)表面疏水鍵被動與蛋白結(jié)合,適合作為分子量>20kD的大分子蛋白的固相載體,其蛋白結(jié)合能力為200~300ng IgG/cm2。由于該類酶標板所具有的僅與大分子結(jié)合的特性,適用于作為未純化抗體或抗原的固相載體,可降低潛在的非特異性交叉反應(yīng)。該類板可以惰性蛋白或非離子去污劑作為封閉液。

  3、氨基化酶標板:

  酶標板經(jīng)表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基,其疏水鍵由親水鍵取代。該類酶標板適合作為小分子蛋白的固相載體。使用合適的緩沖液和pH值,其表面可通過離子鍵與帶負電荷的小分子結(jié)合。由于其表面的親水特性和可通過其它交聯(lián)劑共價結(jié)合的能力,可用于固定溶于Triton-100、Tween 20等去污劑的蛋白分子。該類板的缺陷為由于降低了疏水性,一部分蛋白分子無法結(jié)合;此外,其表面需有效地封閉。由于親水和共價的表面特性,使用的封閉液必須能夠與非反應(yīng)性氨基基團和所選擇的交聯(lián)劑中任何功能基團發(fā)生作用。

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