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實(shí)驗(yàn)干貨—ELISA實(shí)驗(yàn)顯性淡、靈敏度低是為什么?怎么解決?
更新時(shí)間:2023-12-13瀏覽:973次

  實(shí)驗(yàn)干貨—ELISA實(shí)驗(yàn)顯性淡、靈敏度低是為什么?怎么解決?

  Elisa 實(shí)驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。

  酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)

  一、顯色淡,靈敏度偏低

  可能原因及解決方法:

  試劑盒從2~8℃冰箱取出后打開盒蓋,于室溫平試劑盒未充分平衡衡至少20分鐘,確保所有試劑已平衡至室溫(約25℃)樣品一般選擇培養(yǎng)上清、血清、血漿。其他樣品

  2、樣品不適合做ELISA檢測(cè)形式可能不適合做ELISA檢測(cè)或者需要優(yōu)化檢測(cè)的條件(例如稀釋液的成分)

  3、酶標(biāo)板在貯存或洗后拍干時(shí)過分防止板過于干燥,干燥

  4、包被抗體遭到破壞 操作溫和,移液槍不能碰到孔底

  5、樣本和抗體孵育條件不合適,按照說明書條件,建議孵育過程中全程振蕩孵育

  6、洗滌浸泡時(shí)間過長(zhǎng),按照說明書操作,勿人為增加漫泡時(shí)間

  7、偶聯(lián)HRP試劑污染棄去試劑,重新配置

  8、錯(cuò)誤的稀釋偶聯(lián)HRP試劑棄去試劑,重新配置確定合適的孵育時(shí)間:人為判定-最高濃度的標(biāo)準(zhǔn)TMB底物孵育時(shí)間過短,因非人。


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  9、品出現(xiàn)深藍(lán)色;S4-5有淡藍(lán)色;機(jī)器判定620n為因素影響,需要優(yōu)化孵育時(shí)間m波長(zhǎng)下測(cè)定OD值達(dá)到0.6-0.65

  10、樣本濃度過高或存在基質(zhì)效應(yīng)建議做不同稀釋倍數(shù),確認(rèn)樣本最佳稀釋倍數(shù)酶標(biāo)儀濾光片設(shè)置有問題或者波

  11、確認(rèn)儀器設(shè)置及選擇正確的波長(zhǎng)檢測(cè)長(zhǎng)選擇不對(duì)不能使用細(xì)胞培養(yǎng)板,建議使用ELISA專用高吸

  12、酶標(biāo)板不適合做ELISA附力板子

  二、出現(xiàn)白板,陽(yáng)性對(duì)照不顯色

  可能原因及解決方法:

  1、顯色液變質(zhì)更換新的顯色液

  2、洗滌液配制有誤請(qǐng)按說明書所示稀釋倍數(shù)配制

  3、未加酶結(jié)合物而認(rèn)為已加入注意不要漏加

  4、終止液誤作洗滌液稀釋或當(dāng)?shù)孜镆菏褂妹看渭右呵熬鶓?yīng)看清標(biāo)簽請(qǐng)按照說明書所示配置說明書,注意

  5、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋方法錯(cuò)誤/或標(biāo)準(zhǔn)品有問題單位和稀釋倍數(shù),建議使用同批次試劑盒,不能混用不

  6、不同試劑盒或不同批號(hào)的試劑混用,同試劑盒或不同批號(hào)的試劑

  三、不正常的標(biāo)準(zhǔn)曲線

  可能原因及解決方法:

  1、錯(cuò)誤的方法重懸標(biāo)準(zhǔn)品加入正確量的溶液重懸標(biāo)準(zhǔn)品,重懸充分

  2、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋錯(cuò)誤按照說明書要求稀釋標(biāo)準(zhǔn)品

  3、標(biāo)準(zhǔn)品污染用一次性的滅菌吸頭,標(biāo)準(zhǔn)品貯存于2-8℃

  4、錯(cuò)誤的倍比稀釋步驟按照說明書倍比稀釋標(biāo)準(zhǔn)品TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用,

  5、波長(zhǎng)選擇錯(cuò)誤而前者比色波長(zhǎng)為450nm,后者為492nm。雙波長(zhǎng)比色分析優(yōu)于單波長(zhǎng)

  6、標(biāo)準(zhǔn)品混用不同批號(hào)試劑勿混用

  7、試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間,夏季應(yīng)放冰塊降溫長(zhǎng),溫度太高,標(biāo)準(zhǔn)品失ELISA未終止而直接檢測(cè)4顯色需終止后檢測(cè),否則會(huì)出現(xiàn)620nm比450nm讀

  8、50nm和620nm數(shù)高的現(xiàn)象。

  四、OD值超出正常范圍

  可能原因及解決方法:

  1、錯(cuò)誤的樣品或標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋按照說明書稀釋

  2、偶聯(lián)抗體濃度過高按照說明書調(diào)整到最佳的濃度

  3、TMB底物孵育時(shí)間過長(zhǎng)調(diào)整到合適的孵育時(shí)間

  4、樣品或標(biāo)準(zhǔn)品污染避免污染

  5、錯(cuò)誤的孵育時(shí)間或溫度按照說明書

  6、孵育時(shí)未加蓋導(dǎo)致溶液揮發(fā)和污染 貼封片或加蓋

  elisa試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承:遵紀(jì)守法,嚴(yán)于律己,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場(chǎng),較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作,共創(chuàng)美好的未來。

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