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細胞爬片的特點、注意事項及操作步驟
爬片又名細胞爬片,是指讓玻片浸在細胞培養(yǎng)基內,細胞在玻片上生長,主要用于組織學,免疫組織huaxue,冰凍切片,細胞涂片,原位雜交等。
特點:
1.玻片表面經過TC處理,雙面均可使用.
2.γ射線滅菌,保證無菌.
3.使用便捷,只需打開包裝,將爬片放入孔板內,將細胞懸液滴到爬片上即可培養(yǎng).
4.爬片厚度為0.17mm,直徑為8mm/14mm/20mm/25mm.分別適用于48孔細胞培養(yǎng)板/24孔細胞培養(yǎng)板/12孔細胞培養(yǎng)板/6孔細胞培養(yǎng)板
5.吸附:該玻片表面具有持久的陽離子電荷,可以通過靜電作用吸附冰凍切片組織或細胞,使之粘附在玻片上,進而在玻璃和切片組織之間形成共價鍵.因此,無需粘黏劑或者蛋白包被,該玻片也能牢固的粘附切片或細胞。
操作注意事項:
使用細胞爬片時(比如在六孔板中放入爬片,六孔板的孔底面積往往會比爬片面積多出一部分,加細胞懸液時常常就是細胞鋪滿整個孔底,有時細胞生長邊集現(xiàn)象,就是靠近壁邊緣密度要高些,這樣處于中央玻片上爬的細胞數(shù)量就可能相對較少)
比較好的做法是將玻片放入孔板的孔內后,加細胞懸液時只滴到玻片上,一直滴到液體布滿整個玻片又不會溢出玻片邊緣(因為液體表面張力作用可以很容易做到這一點。),放在培養(yǎng)箱里,等細胞貼壁后,取出,再滴加培養(yǎng)基布滿整個孔底,繼續(xù)培養(yǎng),這樣玻片上的細胞生長的密度就會很集中。
保存方式:
細胞爬片有三層包裝,在超凈臺無菌的狀態(tài)下打開包裝.未用完的爬片按原先包裝方式再包裝起來即可。
注:
該爬片表面帶有正電荷,請勿用手觸摸,以免使用效果不佳。
玻片經過γ射線滅菌后,透明玻片顏色會略變?yōu)榈枭?屬正?,F(xiàn)象。
操作步驟:
爬片的準備
1、在超凈臺內,使用75%乙醇擦拭外包裝鋁箔袋
2、拆開鋁箔袋,取出內置器皿后,用尖鑷將內置爬片取出放入所用或培養(yǎng)皿內。
種植細胞
1、用胰酶消化好細胞,充分吹打,使之成單細胞懸液(注意:這一點很重要,關系到將來爬出來片子的質量)
2、種植細胞時,根據(jù)玻片的大小,先在每個孔里準備放爬片的位置滴少量培養(yǎng)基,目的是使玻片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起,然后放玻片,防止加細胞懸液時玻片漂起,造成雙層細胞貼片。整個過程注意無菌操作。
3、根據(jù)自己的需要選擇合適的細胞密度種入培養(yǎng)板內即可
注意事項
1、使用細胞爬片時,(比如在6孔板鐘放入爬片,6孔板的孔底面積往往比爬片面積多出一部分,加細胞懸液時,常常就是細胞鋪滿整個孔底,有時,細胞生長邊集現(xiàn)象,就是靠近壁邊緣細胞密度要高一些,這樣處于中央細胞爬片上的細胞數(shù)量相對較少),比較好的做法是,將爬片放入孔內后,加細胞懸液時,只滴到爬片上,一直滴到液體布滿整個爬片,但又不易溢出爬片邊緣,放到培養(yǎng)箱里,等細胞貼壁后,取出,再滴加培養(yǎng)基布滿整個孔底,繼續(xù)培養(yǎng),這樣爬片上的細胞生長的密度就會很集中。
2、細胞放到爬片上,之后加任何試劑,都應沿培養(yǎng)板板壁少量一點點倒入液體,直到細胞被液體淹沒,盡量不要把細胞沖到細胞爬片以外!
3、爬片表面帶有正電荷,請勿用手觸摸,以免效果不佳!
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