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小鼠CXC趨化因子受體3(CXCR3)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說明書
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  以下是關(guān)于小鼠CXC趨化因子受體3(CXCR3)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說明綜合指南:

  BS-2016  小鼠CXC趨化因子受體3(CXCR3)ELISA試劑盒

  一、試劑盒組成?

  預(yù)包被酶標(biāo)板?:96孔或48孔規(guī)格,含抗小鼠CXCR3單抗

  標(biāo)準(zhǔn)品?:通常為80ng/瓶或240ng/L濃度,提供2-5瓶

  檢測試劑?:

  酶標(biāo)抗體工作液(HRP標(biāo)記)

  顯色液(TMB A/B液)

  終止液(硫酸溶液)

  輔助溶液?:

  10×標(biāo)本稀釋液、20×濃縮洗滌液

  封板膜、密封袋等耗材

  二、樣本處理?

  樣本類型?:血清、血漿、細(xì)胞上清液或組織勻漿

  處理方法?:

  血清/血漿?:1000-3000×g離心10-30分鐘,去除顆?;蚶w維蛋白

  細(xì)胞上清?:離心去除細(xì)胞碎片

  組織勻漿?:生理鹽水勻漿后離心取上清

  保存條件?:-20℃分裝凍存,避免反復(fù)凍融

  三、實(shí)驗(yàn)步驟?(雙抗體夾心法)

  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?:用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液配制梯度濃度(如0-400 ng/L)

  加樣?:

  每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本,37℃孵育1-2小時(shí)

  洗滌?:甩干孔內(nèi)液體,加滿洗滌液靜置30秒,重復(fù)3-5次

  加酶標(biāo)抗體?:每孔加入100μL HRP標(biāo)記抗體,37℃孵育30-60分鐘

  顯色?:加入TMB底物避光反應(yīng)15-30分鐘

  終止與檢測?:

  加終止液(50μL/孔)后立即測定450nm OD值

  根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度

  四、注意事項(xiàng)?

  溫度控制?:

  試劑使用前需室溫平衡20分鐘,避免低溫影響靈敏度

  顯色反應(yīng)需嚴(yán)格避光

  操作規(guī)范?:

  避免孔間交叉污染,使用獨(dú)立槍頭

  邊緣孔易出現(xiàn)“邊緣效應(yīng)",建議棄用外周孔

  數(shù)據(jù)有效性?:

  標(biāo)準(zhǔn)曲線R2應(yīng)≥0.99,復(fù)孔CV值<15%

  五、常見問題?

  靈敏度下降?:可能因試劑未恢復(fù)至室溫或超過有效期

  背景過高?:洗滌不或樣本溶血導(dǎo)致

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