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豬高密度脂蛋白(HDL)ELISA試劑盒實驗使用說明書
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  豬高密度脂蛋白(HDL)ELISA試劑盒實驗使用說明書

  BS-4707 豬高密度脂蛋白(HDL)ELISA試劑盒

  以下是豬高密度脂蛋白(HDL)ELISA試劑盒的實驗使用說明綜合整理:

  一、實驗原理

  采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。預先包被HDL捕獲抗體的微孔板中依次加入標本、標準品和HRP標記檢測抗體,經(jīng)溫育洗滌后,通過TMB顯色反應(藍色→黃色)測定450nm吸光度,顏色深淺與HDL濃度呈正相關(guān)。

  二、樣本處理要求

  血清?:采集后1000×g離心10分鐘分離,避免溶血或脂血;

  血漿?:EDTA/肝素抗凝,1000×g離心30分鐘去除顆粒;

  組織勻漿?:需充分勻漿后離心取上清;

  保存?:2-8℃可存7天,長期需分裝于-20℃以下,避免反復凍融。

  三、試劑盒組成

  預包被微孔板

  HDL標準品(不同濃度)

  HRP標記檢測抗體

  TMB顯色底物、終止液

  洗滌緩沖液(20×濃縮需稀釋)

  四、操作步驟

  加樣?:

  標準品孔:梯度濃度各50μL;

  樣本孔:樣本40μL+稀釋液10μL(5倍稀釋);

  孵育?:37℃避光溫育60分鐘,封板膜密封;

  洗滌?:棄液后加洗滌液靜置30秒,重復5次,拍干;

  顯色?:每孔加TMB底物50μL,37℃避光顯色15分鐘;

  終止?:加終止液50μL,15分鐘內(nèi)測定450nm OD值。

  五、注意事項

  試劑保存?:未使用板條需密封防潮,2-8℃保存;

  操作規(guī)范?:

  不同批號試劑勿混用;

  移液誤差需<2%,避免產(chǎn)生氣泡;

  顯色后顏色異常(如深藍色)需棄用;

  質(zhì)量控制?:

  批內(nèi)CV<10%,批間CV<12%;

  每批次實驗需同步標準曲線。

  六、結(jié)果計算

  以標準品濃度為橫坐標,OD值為縱坐標繪制曲線,通過樣本OD值計算濃度。

  注:本試劑盒僅限科研使用,不可用于臨床診斷,以上資料僅供參考,具體請咨詢技術(shù)老師。

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